Leson 1Détection et confirmation de Listeria (L. monocytogenes) : protocoles d'enrichissement (half-Fraser/Fraser), géloses sélectives (Oxford, PALCAM, ALOA), confirmation biochimique et moléculaireCette section couvre les tests de Listeria et L. monocytogenes dans les produits frais, détaillant les schémas d'enrichissement avec bouillons half-Fraser et Fraser, les choix de géloses sélectives, et les tests confirmatoires biochimiques et moléculaires pour distinguer les souches pathogènes des autres Listeria.
Enrichissement des échantillons en bouillons half-Fraser et FraserUtilisation des géloses Oxford, PALCAM et ALOAMorphologie typique des colonies Listeria et sélectionConfirmation biochimique et différenciation des espècesConfirmation moléculaire et options de sérogroupageLeson 2Levures et moisissures : milieux (gélose Sabouraud Dextrose, DRBC), incubation (25°C, 3–5 jours), identification des colonies et différenciation des bactériesCette section aborde l'énumération des levures et moisissures sur les produits frais, en se concentrant sur les milieux appropriés, les conditions d'incubation, et la reconnaissance des colonies fongiques, tout en les distinguant de la croissance bactérienne et en interprétant les comptages pour la qualité du produit.
Sélection des milieux Sabouraud et DRBCDilution des échantillons et ensemencement étalé ou verséIncubation à 25°C et lecture après 3–5 joursReconnaissance des caractéristiques des colonies levures vs moisissuresDifférenciation des champignons des colonies bactériennesLeson 3Coliformes et E. coli : milieux sélectifs (Violet Red Bile Glucose, VRBG ; TBX ; géloses chromogènes), Nombre Plus Probable (NPP) vs ensemencement direct, conditions d'incubation et confirmation biochimiqueCette section détaille les tests pour coliformes et E. coli dans les produits frais, comparant NPP et ensemencement direct, décrivant les milieux sélectifs et chromogènes, les conditions d'incubation, et les étapes de confirmation biochimique pour distinguer les organismes cibles de la flore de fond.
Utilisation des géloses VRBG, TBX et chromogènesNombre Plus Probable versus ensemencement directTempératures et durées d'incubation pour les indicateursCouleurs et morphologie typiques des colonies sur milieuxConfirmation biochimique d'E. coli et coliformesLeson 4Assurance qualité dans les tests : validation des méthodes, contrôles (positifs, négatifs, blancs), tests de proficiency, limite de détection et quantification, critères de tests répétésCette section se concentre sur l'assurance qualité dans les tests microbiologiques, incluant la validation et vérification des méthodes, l'utilisation routinière des contrôles, les tests de proficiency, la détermination des limites de détection, et les critères pour les décisions de tests répétés ou confirmatoires.
Exigences de validation et vérification des méthodesUtilisation des contrôles positifs, négatifs et blancsGraphiques de contrôle qualité interne et tendancesParticipation aux schémas de tests de proficiencyLimite de détection et règles de tests répétésLeson 5Comptage aérobie total (TAC/TVC) : choix des milieux (gélose à comptage de plaques, PCA), dilutions sérielles, conditions d'incubation (30–37°C, 48–72 h), comptage des colonies et calcul des UFC/gCette section explique les tests de comptage aérobie total pour les produits frais, incluant la sélection des milieux, les schémas de dilutions sérielles, les paramètres d'incubation, les règles de comptage des colonies, et le calcul et rapport des UFC par gramme pour évaluer la charge microbienne globale.
Choix de la gélose à comptage de plaques et milieux associésPréparation des dilutions décimales sérielles des échantillonsSélection de la température et durée d'incubationRègles de comptage des colonies et acceptation des plaquesCalcul et rapport des résultats en UFC par grammeLeson 6Détection et confirmation de Salmonella : pré-enrichissement, enrichissement sélectif (RV, MKTTn), géloses sélectives (XLD, BGA), confirmation sérologique et biochimique et alternatives PCRCette section explique la détection de Salmonella dans les produits frais, du pré-enrichissement et enrichissement sélectif à l'ensemencement sur géloses sélectives, suivi de confirmation sérologique et biochimique, et évaluation des méthodes alternatives basées sur PCR.
Préparation des échantillons et pré-enrichissement non sélectifEnrichissement sélectif en bouillons RV et MKTTnEnsemencement sur XLD, BGA et autres géloses sélectivesFlux de travail de confirmation biochimique et sérologiqueAlternatives PCR et PCR en temps réel pour SalmonellaLeson 7Méthodes rapides et alternatives : PCR présence/absence, immunoessais à flux latéral, systèmes automatisés (BacT/ALERT, TEMPO), avantages/inconvénients et attentes de validationCette section présente les méthodes microbiologiques rapides pour les produits frais, incluant la PCR présence ou absence, les immunoessais à flux latéral, et les systèmes de culture automatisés, et discute de leurs avantages, limitations, besoins de validation, et intégration dans les tests de routine.
Principes des essais PCR présence ou absenceFormats et utilisation des immunoessais à flux latéralSystèmes automatisés tels que BacT/ALERT et TEMPOComparaison avec les méthodes de culture conventionnellesValidation, vérification et critères de performanceLeson 8Flux de travail du laboratoire et biosécurité : réception des échantillons, décontamination, flux unidirectionnel, EPI, gestion des déchets, confinement pour pathogènesCette section décrit le flux de travail du laboratoire de microbiologie et la biosécurité pour les tests de produits frais, en mettant l'accent sur la réception et enregistrement des échantillons, la décontamination, le mouvement unidirectionnel, les EPI appropriés, la gestion des déchets, et les mesures de confinement pour manipuler les pathogènes en toute sécurité.
Réception des échantillons, enregistrement et conditions de stockageFlux de travail unidirectionnel et séparation des zonesUtilisation des EPI et pratiques d'hygiène des mainsDécontamination des surfaces et réponse aux déversementsSégregation, traitement et élimination des déchets
