Somo 1Kushughulikia udhibiti wa epithelial unaoshikamana polepole au nyeti kama wa msingi (kupaka, matriks nje ya seli, tabaka za kulisha)Sehemu hii inaelezea jinsi ya kusaidia udhibiti wa epithelial mdogo au unaoshikamana polepole kwa kutumia mipako ya uso, protini za matriks nje ya seli, na tabaka za kulisha, ikisisitiza uboreshaji wa kushikamana, polarity, na utendaji wa kizuizi huku ikipunguza mkazo.
Kuchagua protini za ECM sahihi na mipakoKuboresha mkusanyiko wa mipako na wakati wa kuwekaUchaguzi, maandalizi, na kuangaza tabaka za kulishaNguvu ya upandaji kwa monolayer za epithelial nyetiKufuatilia umbo na uadilifu wa makutanoSomo 2Mtiririko wa kuyeyusha na kurejesha wa awali: utaratibu wa hatua kwa hatua, ratiba inayotarajiwa, angalia uwezo wa kuishiSehemu hii inaorodhesha mazoea bora ya kuyeyusha cryovials, ikijumuisha kuyeyusha kwa kasi, uchafuzi wa hatua kwa hatua, kuondoa cryoprotectant, mabadiliko ya media ya mapema, na angalia uwezo wa kuishi, na ratiba halisi za kushikamana, kurejesha, na kupitisha kwanza baada ya kuyeyusha.
Kuandaa beseni la maji, media, na vyomboKuyeyusha kwa kasi na hatua za uchafuzi uliodhibitiwaKuondoa DMSO na kupunguza mshtuko wa osmoticAngalia kushikamana na umbo baada ya kuyeyushaKupima wakati wa kupitisha kwanza baada ya kurejeshaSomo 3Muundo wa kawaida wa medium kwa mistari iliyochaguliwa ya uvimbe na udhibiti (medium ya msingi, % sera, virutubishi vya kawaida)Sehemu hii inapitia muundo wa kawaida wa medium kwa mistari ya uvimbe na udhibiti inayowakilisha, ikijumuisha uchaguzi wa medium ya msingi, asilimia ya sera, na virutubishi vya kawaida, na inaelezea jinsi ya kubadilisha mapishi huku ikidumisha phenotypic maalum za ukoo.
Kuchagua media za msingi kwa mistari muhimu ya mfanoAsilimia za kawaida za sera kwa ukooKutumia glutamine, pyruvate, na wakala wa bufferingVifaa vya kukua na virutubishi vya homoniKubadilisha mapishi yanayopendekezwa na wauzaji kwa usalamaSomo 4Nisbati ya kupitisha, ratiba za kugawanya, na kubadilisha kugawanya wakati seli hubadilika wakati wa mara mbiliSehemu hii inaelezea jinsi ya kufafanua nisbati za kupitisha na ratiba za kugawanya, kufuatilia wakati wa mara mbili, na kurekebisha nguvu ya upandaji wakati kukua hubadilika, kuzuia kukua kupita kiasi, senescence, au kushuka huku ikidumisha uthabiti wa majaribio.
Kuhesabu nisbati za kugawanya kutoka kwa hesabu za seliKubuni ratiba za kawaida za kupitishaKufuatilia wakati wa mara mbili na mikunjo ya kukuaKurekebisha nguvu ya upandaji wakati kukua hubadilikaKutambua senescence na kupungua kwa utamaduniSomo 5Hali za incubator: joto, CO2, unyevu, na uchaguzi sahihi wa chombo cha utamaduniSehemu hii inajadili jinsi ya kusanidi hali za incubator, ikijumuisha joto, CO₂, unyevu, na oksijeni inapohusika, na jinsi ya kulinganisha vyombo vya utamaduni na kiasi cha kujaza kwa ubadilishaji gesi, udhibiti wa uvukizi, na hatari ya uchafuzi.
Kuweka viwango vya joto, CO₂, na unyevuKudhibiti sufuria za maji za incubator na kusafishaKutumia utamaduni wa oksijeni ya kawaida dhidi ya iliyopunguzwaKuchagua bakeli, sahani, na vyombo vya tabaka vingiKuboresha kiasi cha kujaza na ubadilishaji gesiSomo 6Kusimamia rekodi wakati wa matengenezo: rekodi za kukua, rekodi za kufunga/kuyeyusha, kufuatilia lote za mediaSehemu hii inashughulikia kusimamia rekodi iliyopangwa kwa matengenezo ya kawaida, ikijumuisha mikunjo ya kukua, historia ya kupitisha, matukio ya kufunga–kuyeyusha, na kufuatilia lote za media, ikiruhusu ufuatiliwa, kutatua matatizo, na hati tayari kwa udhibiti wa sheria za shughuli zote za utamaduni.
Kubuni rekodi sanifu za kukua na kupitishaKurekodi matukio ya kufunga na kuyeyusha kwa pipaKufuatilia nambari za lote za media na virutubishiKuunganisha rekodi na incubator na vifaaMifumo ya rekodi za kielektroniki dhidi ya karatasiSomo 7Itifaki ya kufunga kwa uhifadhi wa muda mrefu: uchaguzi wa cryoprotectant, kiwango cha kupoa, nguvu ya seli lengwa, mpangilio wa uhifadhiSehemu hii inawasilisha mtiririko thabiti wa kufunga, ikishughulikia uchaguzi na mkusanyiko wa cryoprotectant, viwango vya kupoa, nguvu ya seli lengwa, kuweka lebo, na mpangilio wa uhifadhi ili kuhakikisha uwezo wa kuishi wa juu baada ya kuyeyusha na benki thabiti ya muda mrefu.
Kuchagua DMSO na cryoprotectants mbadalaKuandaa medium ya kufunga na nguvu ya seliMbinu za kufunga zenye kiwango kilichodhibitiwa dhidi ya passiveKuweka lebo pipa na ramani za maeneo ya uhifadhiKupima kurejesha baada ya kuyeyusha kutoka pipa za majaribioSomo 8Mtiririko wa kawaida wa subculture: malengo ya confluence, hatua za kuosha, mbinu za kuondoa enzymatic na non-enzymatic, hesabu ya neutralization na upandaji upyaSehemu hii inaelezea mtiririko kamili wa subculture, kutoka kutathmini confluence na kuosha hadi kuondoa kwa enzymatic au nonenzymatic, neutralization, kuhesabu, na hesabu za upandaji upya, ikihakikisha nisbati thabiti za kugawanya na mkazo mdogo wa seli.
Kufafanua malengo ya confluence kwa aina ya seliKuboresha hatua za kuosha ili kulinda monolayerTrypsin na reagenti mbadala za enzymaticKugawanya bila enzymatic na kukata kwa upoleNeutralization, kuhesabu, na hesabu ya upandaji upyaSomo 9Uchaguzi na sababu za aina za sera, virutubishi sanifu bila sera, na sera ya antibioticsSehemu hii inachunguza jinsi ya kuchagua na kuhalalisha aina ya sera, virutubishi sanifu bila sera, na sera ya antibiotics, ikisawazisha utendaji wa seli, uwezekano wa kurudiwa wa majaribio, gharama, na usalama wa kibayolojia huku ikipunguza vigeuzi vya kuchanganya katika vipimo.
Kulinganisha vyanzo vya FBS, FCS, na sera ya binadamuKufuzu lote na upimaji wa kundi la seraKubuni mchanganyiko wa virutubishi sanifu bila seraWakati wa kutumia au kuepuka antibiotics za kawaidaKurekodi na kuhalalisha chaguzi za sera
