Pelajaran 1Pengendalian kawalan epitel primer-lelaki atau lambat lekat yang sensitif (salut, matriks ekstraselular, lapisan pemakan)Bahagian ini menerangkan cara menyokong kawalan epitel rapuh atau lambat lekat menggunakan salut permukaan, protein matriks ekstraselular, dan lapisan pemakan, dengan penekanan kepada pengoptimuman perekatan, polariti, dan fungsi penghalang sambil mengehadkan tekanan.
Memilih protein ECM dan salut yang sesuaiMengoptimumkan kepekatan salut dan masa inkubasiPemilihan, penyediaan, dan penyinaran lapisan pemakanKetumpatan plat untuk monolapisan epitel rapuhMemantau morfologi dan integriti sambunganPelajaran 2Aliran kerja pencairan dan pemulihan awal: prosedur langkah demi langkah, garis masa yang dijangka, pemeriksaan kehidupanBahagian ini menggariskan amalan terbaik untuk mencairkan kriovial, termasuk pencairan cepat, pencairan berperingkat, penyingkiran krioprotektan, pertukaran media awal, dan pemeriksaan kehidupan, dengan garis masa realistik untuk perekatan, pemulihan, dan pujukan selepas pencairan pertama.
Menyediakan bak air, media, dan bekasPencairan cepat dan langkah pencairan terkawalMenyingkirkan DMSO dan meminimumkan kejutan osmotikPemeriksaan perekatan dan morfologi selepas pencairanMasa pujukan pertama selepas pemulihanPelajaran 3Komposisi medium standard untuk garis tumor dan kawalan terpilih (medium asas, % serum, suplemen biasa)Bahagian ini mengkaji formulasi medium standard untuk garis tumor dan kawalan wakil, termasuk pilihan medium asas, peratusan serum, dan suplemen biasa, serta menerangkan cara menyesuaikan resipi sambil memelihara fenotipikh garis keturunan spesifik.
Memilih media asas untuk garis model utamaPeratusan serum biasa mengikut garis keturunanMenggunakan glutamin, piruvat, dan agen penimbalFaktor pertumbuhan dan suplemen hormonMenyesuaikan resipi disyorkan pembekal dengan selamatPelajaran 4Nisbah pujukan, jadual pecahan, dan menyesuaikan pecahan apabila sel mengubah masa penduaanBahagian ini menerangkan cara mentakrif nisbah pujukan dan jadual pecahan, memantau masa penduaan, dan melaraskan ketumpatan penaburan apabila pertumbuhan berubah, mencegah pertumbuhan berlebihan, penuaan, atau hanyutan sambil mengekalkan konsistensi eksperimen.
Mengira nisbah pecahan dari kiraan selMereka bentuk jadual pujukan rutinMenjejaki masa penduaan dan lengkung pertumbuhanMelaraskan ketumpatan penaburan apabila pertumbuhan beralihMengenali penuaan dan kemerosotan kulturPelajaran 5Kondisi inkubator: suhu, CO2, kelembapan, dan pemilihan bekas kultur yang sesuaiBahagian ini membincangkan cara menyusun kondisi inkubator, termasuk suhu, CO₂, kelembapan, dan oksigen jika berkaitan, serta cara memadankan bekas kultur dan isipadu penuh kepada pertukaran gas, kawalan penyejatan, dan risiko pencemaran.
Menetapkan julat suhu, CO₂, dan kelembapanMenguruskan talam air inkubator dan pembersihanMenggunakan kultur oksigen ambient berbanding dikurangkanMemilih labu, plat, dan bekas berlapisMengoptimumkan isipadu penuh dan pertukaran gasPelajaran 6Penyelenggaraan rekod semasa penyelenggaraan: log pertumbuhan, log beku/pencair, penjejakan lot mediaBahagian ini meliputi penyelenggaraan rekod berstruktur untuk penyelenggaraan rutin, termasuk lengkung pertumbuhan, sejarah pujukan, peristiwa beku–pencair, dan penjejakan lot media, membolehkan kebolehjejakan, penyelesaian masalah, dan dokumentasi siap peraturan untuk semua aktiviti kultur.
Mereka bentuk log pertumbuhan dan pujukan standardMendokumentasikan peristiwa beku dan pencair setiap vialPenjejakan nombor lot media dan suplemenMenghubungkan rekod kepada inkubator dan peralatanSistem penyelenggaraan rekod elektronik berbanding kertasPelajaran 7Protokol kriopreservasi untuk penyimpanan jangka panjang: pemilihan krioprotektan, kadar penyejukan, ketumpatan sel sasaran, organisasi penyimpananBahagian ini membentangkan aliran kerja kriopreservasi yang kukuh, meliputi pemilihan dan kepekatan krioprotektan, kadar penyejukan, ketumpatan sel sasaran, pelabelan, dan organisasi penyimpanan untuk memastikan kehidupan selepas pencairan yang tinggi dan bank jangka panjang yang boleh dipercayai.
Memilih DMSO dan krioprotektan alternatifMenyediakan medium pembekuan dan ketumpatan selKaedah pembekuan kadar terkawal berbanding pasifMelabel vial dan memetakan lokasi penyimpananMenguji pemulihan selepas pencairan dari vial pilotPelajaran 8Aliran kerja subkultur rutin: sasaran konfluen, langkah basuh, kaedah pelepasan enzimik dan bukan enzimik, pengneutralan dan pengiraan penaburan semulaBahagian ini menerangkan aliran kerja subkultur lengkap, dari menilai konfluen dan basuhan kepada pelepasan enzimik atau bukan enzimik, pengneutralan, pengiraan, dan pengiraan penaburan semula, memastikan nisbah pecahan konsisten dan tekanan sel minimum.
Mentakrif sasaran konfluen mengikut jenis selMengoptimumkan langkah basuh untuk melindungi monolapisanTripsin dan reagen enzimik alternatifPemisahan bukan enzimik dan kerokan lembutPengneutralan, pengiraan, dan matematik penaburan semulaPelajaran 9Pilihan dan justifikasi jenis serum, suplemen bebas serum yang ditakrif, dan dasar antibiotikBahagian ini mengkaji cara memilih dan membenarkan jenis serum, suplemen bebas serum yang ditakrif, dan dasar antibiotik, mengimbangi prestasi sel, kebolehulangan eksperimen, kos, dan bioselamat sambil meminimumkan pemboleh ubah pengganggu dalam ujian.
Membandingkan sumber FBS, FCS, dan serum manusiaKelayakan lot dan ujian batch serumMereka bentuk campuran suplemen bebas serum yang ditakrifBila menggunakan atau mengelak antibiotik rutinMendokumentasikan dan membenarkan pilihan serum
